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首頁 / 技術服務 / 蛋白質相關 / 蛋白質組綜合服務 / iTRAQ/SILAC/SWATH/蛋白表達純化

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iTRAQ/SILAC/SWATH/蛋白表達純化

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iTRAQ/SILAC/SWATH/蛋白表達純化

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簡介威斯騰生物國家級科技型企業、中關村生物醫學研發檢測共享平臺！
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服務名稱：
iTRAQ/SILAC/DIGE/蛋白表達純化
提供商：
威斯騰生物

同位素標記相對和絕對定量（iTRAQ)
iTRAQ?(isobaric?tags?for?relative?and?absolute?quantitation）技術是由美國應用生物系統公司ABI?研發的一種多肽體外標記技術。iTRAQ?4標?或8標的同位素標記試劑由4種相對分子質量分別為114，115，116和117Da或8種相對分子質量分別為113?，114?，115，116，117，118，119?和121Da的報告基團（reporter?group），相對分子質量分別為31~24Da的質量平衡基團（balance?group）以及一個相同的肽反應標記試劑基?團（peptide?reactive?group）組成。不同的報告基團分別與相應的平衡基團相配后，相對分子質量均為145，即等量異位標簽（isobaric?tag）。

技術優勢：
同時對2-8種不同條件樣品進行蛋白質差異分析；
不會破壞所測定的蛋白質；
適合樣品類型多：胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；
與凝膠分離的蛋白質定量技術相比，iTRAQ質譜定量技術可檢測到更多類型的蛋白質分子，如低豐度蛋白質、強酸（堿）性蛋白質、<10KD或>100KD的蛋白質分子；高通量，可一次實驗，實現多個樣品的蛋白質定性定量；
標記完全，標記效率高達97%以上；
幾乎兼容所有來源的樣本；
定量敏感，反應速度快，實驗周期短。
樣本要求：
動物組織：黃豆粒大小，—80℃冰箱或者液氮保存，干冰運輸；
細胞樣本：細胞量大于10的7次方，—80℃冰箱或者液氮保存，干冰運輸。
結果提供：
樣本質質檢報告；
實驗原理、操作流程、試劑耗材、結果說明；
提供標準生物學分析。

SILAC標記定量蛋白質組學
SILAC?的是分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸，細胞經?5-6?個倍增周期后，穩定同位素的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合，經分離、純化后進行質譜鑒定。
技術優勢
·?該技術屬于體內標記，標記效果穩定，細胞在傳代6-8代之后，蛋白標記效率可達90%以上。其標記效率不受裂解液的影響，不僅適合與進行全細胞蛋白的分析，還適合膜蛋白的鑒定與定量。
·?標記是在樣本處理前引入，隨后進行蛋白質分離、酶切和鑒定，后續實驗對樣品的影響一致，故樣品處理所帶來的定量誤差會很低。在檢測極低水平的蛋白變化或翻譯后修飾時，這一點特別有用。
·?SILAC靈敏度高，樣本量要求少，通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量。
·?采用質譜定量，定量結果準確且批次變異小，重復性好。
·?體內代謝標記與SDS-PAGE或色譜分離技術相結合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白質限制。

SWATH技術檢測
SWATH（Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions）是瑞士蘇黎世聯邦理工學院的 Ruedi Aebersold 博士及其團隊與 AB-SCIEX 于 2012 年聯合推出的一項全新的質譜采集模式技術。SWATH技術具有靈敏度高，重現性強，準確度高，高通量，線性動態范圍大等優點。傳統的質譜數據采集方式為數據依賴型（Data-dependent acquisition，DDA）采集方式也叫做 Shot-gun 法，在一級質譜掃描中，根據母離子的強度高低來選擇母離子進行串聯質譜的掃描，得到二級譜圖在蛋白數據庫進行搜索。這種掃描方式會丟失大量有用的譜圖，同時重復性較差。
SWATH 采集模式是一種新型的 MS/MS 掃描技術，屬于數據非依賴型采集方式（Data-independent acquisition，DIA）。DIA按照設定的方法，將所有的母離子都進行串聯質譜掃描。SWATH 根據酶解肽段的質荷比和洗脫時間來設計采集二級譜圖的離子窗口。以掃描范圍 400～1200 為例，m/z 25 作為一個掃描間隔（SWATH），每個 SWATH 掃描時間設定為100ms，那么該掃描范圍累計需要 32個掃描窗口，完成一次掃描僅需要 3.2秒。
SWATH流程圖如圖所示，分為以下幾個步驟：
1）蛋白質的提取，酶解和純化。
2）酶解后的肽段進行 shotgun檢測，用 proteinpilot進行數據庫檢索，得到蛋白定性
3）根據 shotgun 的檢測結果，確定 SWATH 的掃描間隔等質譜參數，進行樣本的 SWATH檢測，每個樣本重復檢測3次。
4）用shotgun 的檢索結果建立離子譜圖庫，SWATH樣本檢測到的譜圖信息使用Peakview在離子庫中進行蛋白的匹配和定量信息的提取。
5）將Peakview導出的蛋白結果導入到 Makerview進行數據處理，得到蛋白定量結果。

蛋白表達純化
隨著蛋白藥物市場的快速發展和蛋白質組學研究的深入，高純度活性蛋白的需求越來越大。威斯騰生物中心組建了一支由多名具深厚生物技術基礎與制藥企業工作經驗的留學歸國人員和國內專家為核心的團隊?？蔀閲鴥韧饪蛻籼峁幕虻降鞍准兓恼准夹g服務。
威斯騰服務特色
穩定而多樣的表達系統：威斯騰生物已建立整套的基因克隆與表達體系，無論是單個基因的克隆、表達與純化，還是多個基因高通量的基因克隆、表達和純化，均能選用適合您試驗（科研項目）需要的表達系統和合適的表達載體為您提供優質的服務。
多種純化方式：可為客戶提供多種蛋白純化服務，純化方式包括親和層析純化、凝膠過濾、離子交換、疏水層析等，客戶可根據需要選擇合適的純化方式。
專業的團隊和良好的信息管理體系：專業的基因克隆、蛋白表達與純化技術人員與團隊，具有豐富的表達和純化經驗，可為客戶解決各種瓶頸問題, 良好信息管理體系使我們能夠為客戶提供成熟、高效的基因克隆服務。
操作流程
大腸桿菌和酵母蛋白表達系統：
合成基因（另外收費）或者客戶提供
SDS-PAGE檢測表達
Western blot檢測表達（可選）模板(cDNA、基因組DNA、質粒等)
構建表達載體
篩選陽性克隆
表達優化和可溶性分析
提供結果
１、構建的表達載體及測序報告
２、SDS-PAGE結果
３、篩選的表達菌株
４、Western blot結果
５、實驗流程及結果
６、2ml 1.0×108pfu/ml的病毒（利用昆蟲桿狀病毒蛋白表達系統表達時）
穩定表達細胞株（哺乳動物細胞）

實驗服務流程

威斯騰生物服務項目

分子生物學類	蛋白質與免疫學	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯免疫吸附法）技術	Western-blot 實驗服務	脊髓損傷模型
生化指標檢測	蛋白雙向電泳實驗服務	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達純化	骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質組學	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒類	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化	細胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細胞培養	肝纖維化模型
細胞因子芯片	骨髓間充質干細胞培養	膽結石模型
生長因子芯片	脂肪干細胞培養	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細胞培養	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細胞培養	體內血栓模型
生長因子芯片	血管內皮細胞培養	關節炎模型
炎癥因子芯片	神經元細胞培養	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內皮組細胞原代培養	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關服務	動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細胞生物學	高通量測序	代謝組學
細胞原代培養	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細胞周期檢測	RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性	單細胞測序	PET-CT
藥物篩選細胞學實驗	circleRNA測序
細胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理類	CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入	科研方案設計與SCI相關服務
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文獻論著翻譯
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠	SCI論文翻譯潤色服務
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等）		臨床實驗/科研實驗設計方案指導
行為學檢測	藥物篩選服務項目	藥效學評價
水迷宮實驗	高通量自動藥物篩選平臺	神經系統藥物藥效學評價
曠場實驗	細胞高內涵藥物篩選平臺	抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測	蛋白質組學靶標研發平臺	心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測	分子藥理研究平臺	泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳	生物膜片鉗藥物篩選平臺	內分泌系統藥物藥效學評價
	常規藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學評價

【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！
【全國免費熱線】400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
【郵箱】 china-western@163.com
【官網網址】www.cqwestern.com
【地址】重慶市高新區二郎創業大道高科創業園D棟2樓

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