多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區分開?有多少同學還在犯暈?
今兒這貼,師兄就帶你區分區分,撥開那扇 PCR 迷霧。
什么是 RT-PCR?RT-PCR就是逆轉錄 PCR(reverse transcription PCR)或者稱反轉錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉錄成為互補
DNA,再以此為模板通過PCR進行 DNA擴增。
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RT-PCR原理與實驗技術、
RT-PCR技術概述、PCR/RT-PCR疑難問題解答那什么是 qPCR、Real-time-PCR?其實 Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )是一碼事,都是實時定量PCR,指的是PCR過程中每個循環都有數據的實時記錄,因此可以對起始模板數量進行精確的分析。
雖然Real-time PCR(實時熒光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反轉錄PCR)看起來都可以縮寫為RT-PCR,但是,國際上的約定俗成的是:RT-PCR特指反轉錄PCR,而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(quantitative real-time PCR)
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QPCR的基礎知識、QPCR常見問題及其分析、qPCR失敗,罪魁禍首原來是那什么是 real-time RT-PCR(或RT-qPCR)?real-time RT-PCR中間的“RT”是 reverse transcription(逆轉錄),整個意思就是利用 mRNA 或 總RNA 為模板的實時逆轉錄PCR技術(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的組合,是說將mRNA逆轉錄為
cDNA后再作為模板進行實時熒光PCR分析,因為RT-PCR是可以定性的,但不能進行定量檢測的。
所以不難理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是結合了熒光定量技術的反轉錄PCR:先從 RNA 反轉錄得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR進行定量分析(qPCR)。
所以,實時熒光定量PCR,它不僅可以用cDNA作為模板,也可以用
基因組DNA等作為模板。
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